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高纯金银花提取物绿原酸----提取,分离纯化

      高纯金银花提取物绿原酸金银花中绿原酸的提取、分离纯化

 绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸,异名咖啡鞣酸,是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径代谢产生的苯丙素类化合物。

绿原酸

由结构可以看出它是含有羧基和邻二酚羟基的极性有机酸化合物,为酸性。由于分子内含有邻二酚羟基,受热、见光易氧化,因此供试液要在阴凉、避光下保存备用,且高温和长时间加热不利于绿原酸的提取。在碱性条件下,绿原酸易发生水解,植物体内存在的绿原酸往往是混合物而非单一组分。

 

一、实验目的:

1、了解金银花中有关成分,掌握绿原酸的相关性质,设计提取方案

2、掌握pH梯度萃取法分离所需成分

3、掌握聚酰胺柱层析的方法

二、实验试剂、仪器

     试剂:金银花,乙醇(70%、10%),盐酸(6mol/L),乙酸乙酯,NaOH(5%),乙酸,聚酰胺,硅胶

仪器:冷凝回流装置,抽滤装置,旋蒸仪,分液漏斗,层析柱

三、绿源酸的提取、分离和纯化

(1)提取:

称取金银花50g加入1000mL的圆底烧瓶中,加入500mL(10倍量)70%的乙醇,75℃冷凝回流3h,倒出液体,再用400mL(8倍量)、400mL(8倍量)回流两次,每次2h,过滤,合并滤液,然后80℃下浓缩滤液或者是用旋蒸仪旋干滤液至无醇味。

(2)分离纯化:

①取金银花提取浓缩液,以浓度6mol/L的HCl溶液调pH值至3.0左右,以3倍量的乙酸乙酯分3次萃取,合并萃取液(乙酸乙酯层),以5%的NaOH溶液调萃取液pH至8.0左右,分取水层减压浓缩。

②取金银花浓缩液,用聚酰胺拌样,用聚酰胺(80-100目)装柱(用量大概为绿原酸粗品的5倍),装入柱径与柱长比为1:7的层析柱中,常压下用10%的乙醇作为洗脱剂洗脱,收集流分,点样与标准品对照(标准品用50%的甲醇溶解,0.2mg/mL),合并相同流分,旋干即为所要提取的绿原酸。展开剂为乙酸乙酯:乙酸:水=2:1:1(硅胶色谱)。

(将相同流分合并后用乙酸乙酯重结晶能提高纯度)

 

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